高效液相色谱法测定排石利胆片中芍药苷的含量

【摘要】 目的 建立排石利胆片中芍药苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱：Hypersil ODS-3 C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(18∶82);检测波长为230 nm,流速1.0 mL/min。结果 芍药苷在0.06～0.36 μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9,平均回收率为99.77%,RSD=1.35%(n=6)。结论 该方法简单、快速、准确,可用于该制剂中芍药苷的质量控制。

【关键词】 排石利胆片;芍药苷;高效液相色谱法;含量测定

Abstract：Objective To establish a method for determination of paeoniflorin in Paishilidan tablets by HPLC. Method Hypersil ODS-3 C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used, acetonitrile-0.1% phosphoric acid (18∶82) was the mobile phase, detection wavelength was at 230 nm, and the flow rate was 1.0 mL/min. Result The linear range of paeoniflorin was 0.06～0.36 μg, r=0.999 9, and the average recovery was 99.77% with RSD of 1.35% (n=6). Conclusion The method was simple, quick and accurate, and available for quality control of the preparation.

Key words：Paishilidan tablets;paeoniflorin;HPLC;content determination

排石利胆片由茵陈、柴胡(醋炙)、金钱草、龙胆、赤芍、郁金、蒲黄、大黄、五灵脂、芒硝10味中药组成,具有舒肝理气、排石利胆功能,用于治疗胆囊炎、胆石症,原方收载于《卫生部药品标准?中药成方制剂》第20册。张氏[1]报道了高效液相色谱(HPLC)法测定排石利胆颗粒中龙胆苦苷的含量。李氏等 [2]报道了排石利胆片中绿原酸的含量测定方法。目前未见对其中芍药苷含量测定的报道。为确保制剂质量,我们建立了HPLC法测定排石利胆片中芍药苷含量的方法,现报道如下。

1 仪器与试药

岛津10A-vp高效液相色谱仪,SPD-ML0Avp二极管阵列检测器,Shimadzu CLASS-VP色谱工作站。岛津UV-1601紫外-可见光分光光度计。AS3120A型超声波清洗器。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号 110736- 200732),排石利胆片为陕西合生医药研究所剂型研发制剂,批号20090805、20090807、20090811。乙腈(色谱纯),纯化水,其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS-3 C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(18∶82),检测波长为230 nm,流速1.0 mL/min。理论塔板数按芍药苷色谱峰计应不低于3 000。芍药苷与其他组分完全分离。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取芍药苷对照品适量,加甲醇制成含芍药苷0.024 mg/mL的溶液。

2.2.2 供试品溶液 将供试品研为细粉,取约0.9 g,精密称定,置50 mL容量瓶中,加甲醇约40 mL,摇匀,超声(120 W,40 kHz)处理30 min,放至室温,加甲醇至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按处方比例称取缺赤芍的药材,按照排石利胆片生产工艺制备后作为阴性样品,按“2.1.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 干扰试验

精密量取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL注入液相色谱仪,记录色谱图。对照品溶液与供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰,阴性样品对测定无干扰。

2.4 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL注入液相色谱仪中,按上述色谱条件进行测定。以进样量X为横坐标,色谱峰面积Y为纵坐标,经线性回归,得回归方程：Y=1.724×106X-1.060×104,r=0.999 9。结果表明,芍药苷在0.06～0.36 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 μL,连续进样5次,测定芍药苷的峰面积,结果RSD=1.67%(n=5)。

2.6 重复性试验

取同一批样品(批号20090805)5份,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,进样10 μL,结果芍药苷平均含量为4.92 mg/g, RSD=1.45%(n=5)。

2.7 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液10 μL,分别于0、2、6、12、24 h进样测定,结果RSD=1.70%(n=5),表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量样品(4.92 mg/g)6份,分别精密加入芍药苷对照品甲醇溶液(浓度为2.40 mg/mL)1 mL,再按供试品溶液制备方法制备,进样10 μL,测定计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

称样量

(g) 供试品含

量(mg) 加入量

(mg) 测得量

(mg) 回收率

(%) 平均回收

率(%) RSD

(%)

0.475 5 2.34 2.40 4.73 99.65

0.486 0 2.39 2.40 4.81 100.83

0.482 5 2.37 2.40 4.74 98.63 99.77 1.35

0.492 5 2.42 2.40 4.82 99.91

0.486 2 2.39 2.40 4.83 101.62

0.475 5 2.34 2.40 4.73 99.65

2.9 样品含量测定

按供试品溶液制备方法制备供试液,进样10 μL测定,照外标法计算样品中芍药苷含量,结果见表2。

表2 芍药苷含量测定结果

批号 芍药苷含量(mg/g)

20090805 4.92

20090807 4.25

20090811 4.26

3 讨论

经对芍药苷紫外扫描,在230 nm处有最大吸收,因此,检测波长选取230 nm。

供试品溶液的制备我们先考察了热回流法,结果随着时间增加,含量有降低趋势。这可能与芍药苷对热不稳定有关[3]。因此选用超声提取法。在提取时间上, 考察了超声处理15、30、45 min,结果超声30 min时含量较高。在供试品溶液制备中分别考察了50%乙醇、甲醇超声30 min提取,结果两者含量无明显差异,但50%乙醇提取液色谱基线杂质峰较多,因此,供试品溶液制备采用甲醇提取。

【参考文献】

[1] 张虹.高效液相色谱法测定排石利胆颗粒中龙胆苦苷的含量[J].中国药师,2008,11(8)：953-954.

[2] 李瑞莲,雷玉萍.排石利胆片质量标准的研究[J].中国药品标准,2006, 7(6)：49-50.

[3] 陈世虎,李国华.乳核内消颗粒中芍药昔的稳定性研究[J].中药材, 2005,28(11)：1038-1039.

来源：实验与分析