高效液相色谱法测定人参渣中人参多糖的含量

人参，别名为山参、园参，为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，其叶也入药，称为参叶。我国是世界上人参生产大国，其产量占全世界的60%，种植地主要分布于我国东北各省，辽宁、吉林有大量栽培，近年河北、山西、陕西、甘肃、宁夏、湖北等省区也有种植[1]。作为我国特产的珍贵药材之一，人参具有调节中枢神经系统、改善心脏功能、降血糖作用、增强机体的免疫功能、抗肿瘤、抗氧化等作用，因而自古以来就被作为名贵的补品。

人参以其特殊的医疗保健功能，得到充分的开发利用，如今人参加工产品种类越来越多，如人参保健品、人参药酒等，但是大量废弃的根渣中仍含有丰富的活性成分。人参多糖 (ginseng polysaccharide,GPS) 作为人参的主要活性成分之一，具有提高肌体免疫力、抗肿瘤、降血糖以及调控血细胞生成的作用[2]。国内测定多糖含量常用硫酸草焱和硫酸脖椒臃止夤舛确ǎ 但误差较大，现有的比色重现性差，受影响因素多，尤其蒽酮试液加热后对最大吸收峰影响较大。高效液相色谱法是在经典的液相色谱基础上发展起来的一种高效、高速、高灵敏度的分析方法，目前其应用已超过气相色谱法[3]。本文采用高效液相色谱法对人参渣中的人参多糖进行定量分析，为综合开发利用人参的新途径提供科学参考依据。

1 仪器与试剂

Agilent technologies1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司);光电二极管阵列检测器;N2000 色谱数据工作站;UV2500型紫外可见分光光度计(日本岛津公司);TGL16G高速冷冻离心机(香港力康发展有限公司);KQ250B超声波清洗机 (昆山市超声仪器有限公司)。D参匏葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号：1108332200302，供含量测定用);甲醇(HPLC级，美国 Tedia公司);人参渣为保健品公司产品加工后的人参渣废弃物。

2 方法与结果

2.1 波长选择

称取D参匏葡萄糖对照品1.0mg，置于100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，用紫外分光光度计在200～400nm波长范围内扫描，分析紫外吸收图谱可见，葡萄糖在214nm处有最大吸收峰，因此选择此处为检测波长。

2.2 色谱条件

色谱柱Nova Pak C18 (150mm×3.9mmColumn，4μm，美国Waters公司);流动相为水布状(1∶1)，用磷酸调节pH值至3.0;流速为1ml/min; 柱温30℃;检测波长为214nm;进样量为20μl。在上述色谱条件下，D参匏葡萄糖的保留时间为6.687min。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取一定量的经80℃ 干燥至恒重的D参匏葡萄糖对照品，加流动相制成浓度为10mg/ml的对照储备溶液。

2.4 供试品溶液的制备

将人参渣经60℃减压干燥24小时后，粉碎、过筛，得到100目的人参渣粉。加适量纯净水常温浸泡1小时，加热至45℃，超声波功率200W，超声提取 30min，过滤后将滤液浓缩至原体积的1/3，向浓缩液中加乙醇使含醇量达85%，静置12小时，离心(3000r/min)15min，弃去上清液，取沉淀物于恒温干燥箱中干燥后即得多糖粗品。将所得多糖粗品溶于适量流动相，于100℃条件下水浴90min，得到供试品溶液。

2.5 线性关系考察

取对照储备液，依次稀释成浓度为0.5、1、2、4、6、8、10mg/ml的溶液进行HPLC测定，以峰面积为纵坐标、溶液质量浓度为横坐标绘制标准曲线，求得回归方程为Y=95736X+ 482411，r2= 0.9995(n=7)，结果表明葡萄糖质量浓度在0.5～10mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.6 精密度试验

取对照储备溶液，将其稀释成浓度为0.2mg/ml的溶液，精密吸取20μl，连续进样6次，测得葡萄糖峰面积的相对标准偏差(RSD值)为0.58%(n=6)，表明该法具有良好的精密度。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液，按进样色谱条件分别于0、4、8、12、24小时测定葡萄糖峰面积，得到RSD值为0.96%，表明供试品溶液在24小时内稳定。

2.8 重复性试验

精密称取人参渣粉6份，每份约5g，按2.3项方法制备，置于100ml容量瓶中，加流动相至刻度，进样20μl，用HPLC法测定每份样品中人参多糖的含量。结果测得1mg人参渣中人参多糖(以D参匏葡萄糖计)的平均含量为0.3802mg。RSD=1.68 %，表明试验重复性好。

2.9 加样回收率试验

精密称取人参渣粉6份，每份约50g，按2.3项方法制备，置于100ml容量瓶中，加流动相至刻度，进样20μl，用HPLC法测定。计算平均加样回收率为100.43%，其RSD值为1.06%，见表1。表1 样品加样回收率试验结果

3 讨 论

制备供试品溶液的过程中，分别进行不同水解时间的考察，发现随着时间延长，水解效果越好，但当水解达到90min后，峰面积无明显变化，故选择90min为本实验的水解时间。

目前常用的多糖类化合物的提取技术主要有[4]：①热水浸提法;②水提醇沉法;③碱提取法;④酸提取法;⑤超声提取法;⑥酶提取法。其中，超声提取技术适用于天然产物，特别是中草药有效成分如多糖、黄酮等各种类型成分的提取，是中药制药彻底改变传统提取工艺的新方法、新工艺[5]。与常规的提取方法相比，该法具有提取温度低、适用性广、能耗低等特点。另外，超声波破碎过程是一个物理过程，提取过程中无化学反应，被提取的生物活性物质在短时间内保持不变，生物活性不减，同时，提高了细胞破碎速度，缩短了破碎时间，可极大地提高提取效率[6]。本研究比较了水提醇沉法和超声提取法的多糖提取效率，发现超声提取不仅多糖含量要高出12%，且节省大部分时间。

本研究建立了HPLC法测定人参渣中活性成分—人参多糖的含量，该法准确可靠、易操作、灵敏度高，测得人参渣中含有38%的人参多糖，说明人参渣仍具有进一步开发利用的价值。

【参考文献】

[1] 宋小妹,唐志书.中药化学成分提取分离与制备[M].北京:人民卫生出版社,2009.72.

[2] 赵俊,吴宏,王亚平.人参多糖的化学与药理学研究进展[J].国外医学，中医中药册,2004,26(2):7981.

[3] 高文远.现代中药质量控制及技术[M].北京:科学出版社,2010.63.

[4] 张昌军,原方圆,邵红兵.超声波法在提取多糖类化合物中的应用研究[J].化工时刊,2007,21(2):5456.

[5] 宋小妹,唐志书.中药化学成分提取分离与制备[M].北京:人民卫生出版社,2009.8.

[6] 邓修.中药制药工程与技术[M].上海:华东理工大学出版社,2008.127128.

来源：实验与分析