液相色谱系统图谱相关知识问答

　　液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

　　1峰拖尾

　　原因和解决方法

　　1、筛板阻塞

　　a、反冲色谱柱

　　b、更换进口筛板

　　c、更换色谱柱

　　2、色谱柱塌陷

　　填充色谱柱

　　3、干扰峰

　　a、使用更长的色谱柱

　　b、改变流动相或更换色谱柱

　　4、流动相PH选择错误

　　调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

　　5、样品与填料表面的溶化点发生反应

　　a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

　　b、更改色谱柱

　　2峰前延

　　原因和解决方法

　　1、柱温低

　　升高柱温

　　2、样品溶剂选择不恰当

　　使用流动相作为样品溶剂

　　3、样品过载

　　降低样品含量

　　4、色谱柱损坏

　　更换色谱柱

　　3峰分叉

　　原 因和解决方法

　　1、 保护柱或分析柱污染

　　取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

　　2、样品溶剂不溶于流动相

　　改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

　　4峰变形

　　原 因和解决方法

　　1、样品过载

　　减少样品载量

　　5早出的峰变形

　　原 因和解决方法

　　1、样品溶剂选择不恰当

　　a、减少进样体积

　　b、运用低极性样品溶剂

　　6早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

　　原 因和解决方法

　　1、柱外效应

　　a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)

　　b、使用小体积的流通池

　　7K’增加时，脱尾更严重

　　原 因和解决方法

　　1、二级保留效应，反相模式

　　a、加入三乙胺(或碱性样品)

　　b、加入乙酸(或酸性样品)

　　c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)

　　d、更换一支柱子

　　2、二级保留效应，正相模式

　　a、加入三乙胺(或碱性样品)

　　b、加入乙酸(或酸性样品)

　　c、加入水(或多官能团化合物)

　　d、试用另一种方法

　　3、二级保留效应，离子对

　　加入三乙胺(或碱性样品)

　　8酸性或碱性化合物的峰拖尾

　　原 因和解决方法

　　1、缓冲不合适

　　a、使用浓度50-100mM的缓冲液

　　b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

　　9额外的峰

　　原 因和解决方法

　　1、样品中有其他组份

　　2、前一次进样的洗脱峰

　　a、增加运行时间或梯度斜率

　　b、提高流速

　　3、空位或鬼峰

　　a、检查流动相是否纯净

　　b、使用流动相作为样品溶剂

　　c、减少进样体积

　　10保留时间波动

　　原 因和解决方法

　　1、温控不当

　　调好柱温

　　2、流动相组分变化

　　防止变化(蒸发、反应等)

　　3、色谱柱没有平衡

　　在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

　　11保留时间不断变化

　　原 因和解决方法

　　1、流速变化

　　重新设定流速

　　2、泵中有气泡

　　从泵中除去气泡

　　3、流动相选择不恰当

　　a、更换合适的流动相

　　b、选择合适的混合流动相

　　12基线漂移

　　原 因和解决方法

　　1、柱温波动

　　控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

　　2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)

　　使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

　　3、流通池被污染或有气体

　　用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)

　　4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线)

　　取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

　　5、流动相配比不当或流速变化

　　更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

　　6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

　　用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

　　7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

　　检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

　　8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

　　使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

　　9、使用循环溶剂，但检测器未调整。

　　重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

　　10、检测器没有设定在最大吸收波长处。

　　将波长调整至最大吸收波长处

　　13基线噪音(规则的)

　　原 因和解决方法

　　1、在流动相、检测器或泵中有空气

　　流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

　　2、漏液

　　检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

　　3、流动相混合不完全

　　用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

　　4、温度影响(柱温过高，检测器未加热)

　　减少差异或加上热交换器

　　5、在同一条线上有其他电子设备

　　断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

　　6、泵振动

　　在系统中加入脉冲阻尼器

　　14基线噪音

　　原 因和解决方法

　　1、 漏液

　　检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。

　　2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成

　　检查流动相的组成。

　　3、流动相各溶剂不相溶

　　选择互溶的流动相

　　4、检测器/记录仪电子元件的问题

　　断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

　　5、系统内有气泡

　　用强极性溶液清洗系统

　　6、检测器内有气泡

　　清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

　　7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。)

　　用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

　　8、检测器灯能量不足

　　更换灯

　　9、色谱柱填料流失或阻塞

　　更换色谱柱

　　10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常

　　维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

　　15宽峰

　　原 因和解决方法

　　1、流动相组成变化

　　重新制备新的流动相

　　2、流动相流速太低

　　调节流速

　　3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)

　　检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。

　　4、检测器设定不正确

　　调整设定

　　5、柱外效应影响

　　a、柱子过载

　　b、检测器对反应时间或池体积响应过大

　　c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大

　　d、记录仪响应时间太长

　　6、缓冲液浓度太低

　　增加浓度

　　7、保护柱污染或失效

　　更换保护柱

　　8、色谱柱污染或失效，塔板数较低

　　更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。

　　9、柱入口塌陷

　　打开柱入口，填补塌陷或更换柱子

　　10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰

　　选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

　　11、柱温过低

　　提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃

　　12、检测器时间常数太大

　　使用较小的时间常数

　　16分离度降低

　　原 因和解决方法

　　1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)

　　重新配置流动相

　　2、保护柱或分析柱阻塞

　　去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。

　　17所有的峰面积都太小

　　原 因和解决方法

　　1、检测器衰减设定过高

　　减少衰减的设定

　　2、检测器时间常数设定太大

　　设定较小的时间常数

　　3、进样量太少

　　增大进样量

　　4、记录仪连接不当

　　使用正确的连接

　　18所有的峰面积都太大

　　原 因和解决方法

　　1、检测器衰减设定过低

　　采取较大的衰减

　　2、进样过多

　　减少进样量

　　3、记录仪连接不正确

　　正确连接记录仪

来源：实验与分析