LC-MS/MS方法检测食品中氯霉素残留

卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》，上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现，包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂，同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障，上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法，现将LC-MS/MS检测食品中氯霉素残留的方法公布如下：

1. 适用范围

本方法适用于食品中氯霉素残留的检测。

2. 提取

称取相当于原始样品5g(精确至0.01g)的制备好的试样，置于50 mL具塞离心管中，准确加入100μL氯霉素-d5(200ng/mL)内标溶液，加入15 mL乙酸乙酯，振荡10 min，以3000 r/min离心10 min，吸取上层乙酸乙酯，置于50mL具塞离心管或25mL玻璃刻度离心管中,再加10mL乙酸乙酯提取第二次，合并提取液，在45°C±5°C,水浴用氮气吹干仪吹干待净化。

a. 对于含脂肪量底低的样品,加入2 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL正己烷(用乙腈饱和过)，涡旋1 min，静置分层，弃去上层正己烷层.如果样品中含有较多的脂肪,则重复上述净化步骤直到正己烷层变清。乙腈层氮气吹干，5 mL 20%甲醇水溶液复溶，待净化;

b. 对于加工过的及含脂肪量高的水产品或肉类,加入1 mL甲醇,涡旋1 min,加入15 mL 4%的氯化钠溶液，10 mL正庚烷，振摇30 sec，静置分层(若分层不好，可稍加离心，1000 rpm,1 min)，弃去上层正庚烷层，再加入10 mL正庚烷重复一次去油步骤，下层液体待净化。

3. 净化

活化/平衡：依次用3 mL甲醇和3 mL水通过Welchrom® BRP, 60mg/3mL (P/N：WSP010306)固相萃取小柱，流出液弃去;

上样：将上述待净化液加入柱中，流出液弃去;

淋洗：用3 mL 20%甲醇淋洗小柱，流出液弃去;

洗脱：3 mL甲醇洗脱，收集洗脱液

40℃氮气吹干，1 mL 50% 甲醇溶解，0.22μm针孔滤膜过滤后，待分析;

4. 色谱质谱条件

4.1 色谱条件

色谱柱： Xtimate C18 液相色谱柱(2.1 mm*50 mm, 3 μm)

流动相：

时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 75 25 3 75 25 6 2 98 8 2 98 8.1 75 25 12 75 25

A: 纯水

B：乙腈

梯度洗脱

流速： 0.4 mL/min

进样量： 10 μL

柱温： 40°C

运行时间：12 min

4.2 质谱条件

扫描模式：MRM

离子源：ESI+

毛细管电离电压：3000v

干燥气温度：350 ℃

干燥气流速：11 L/min

雾化器压力：50 psi

名称	母离子	子离子	碎裂电压 （Fragment）	驻留时间 （ms）	碰撞能量 （V）	定量离 子对	定性离 子对
氯霉素（CAP）	321.0	152.1	110	100	18	+	-
		257.2	110	100	11	-	+
		120.9	110	100	23	-	+
CAP-D5	326.1	157.1	120	100	20	+	-

5. 结果

5.1 回收率和重现性实验

将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后，分别添加一定量的标准溶液，添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验，共3个批次（样品典型回收率色谱图见附图）。

添加水平（μg/kg）
分析物	0.5		2		10
	Recovery (%)	RSD (%)	Recovery (%)	RSD (%)	Recovery (%)	RSD (%)
氯霉素	103.9	9.29	97.5	3.53	95.5	6.27

5.1 色谱图

图 鳕鱼中添加10 mg/kg 氯霉素EIC谱图

本方法中使用到得耗材：

1. 固相萃取小柱：Welchrom® BRP, 60mg/3mL (P/N：WSP010306)

2. 色谱柱：Xtimate C18, 2.1*50 mm，3μm(P/N:Xt3B18205)

3. 13mm，孔径0.22μm尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)

4. 12孔固相萃取装置(WEL-Vac-12)

来源：实验与分析