熟牛肉中的五种人工合成色素的测定

卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》，上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现，包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂，同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障，上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法，现将熟牛肉中的五种人工合成色素的测定方法公布如下：

1. 适用范围

适用于熟牛肉中的五种人工合成色素(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄 、亮蓝)的测定。

2. 提取

精确称取2±0.2 g 粉碎后的熟牛肉，于50 mL聚丙烯离心管中，加入5 mL丙酮：水（90:10）混合溶液，涡动1min，均质1min（1000rpm），4000 rpm离心5 min，转移上清液于50 mL离心管中，残渣用5 mL丙酮：水（90:10）混合溶液重复提取两次，合并上清液。上清液中加入10 mL石油醚（60-90℃），上下翻转5次，4000rpm离心3min，除去石油醚层，下层于80 ℃氮吹至2 mL以下，加入定容至5 mL，混匀，待净化。

3. 净化

预处理：向Welchrom^® P-WAX（60mg/3mL）中加入3 mL甲醇、3 mL水，流出液弃去；

上样：将上述提取液加入柱中，流出液弃去，用5 mL水涮洗样品管，转入SPE柱；
淋洗：3 mL甲醇、3 mL甲醇：甲酸（6：4）依次过柱、3 mL正己烷过柱，小柱真空干燥5 min；

洗脱： 3*1 mL 5%甲醇洗脱，收集；

重新溶解：80 ℃氮吹至干，1 mL水复溶，涡动30 s，过0.22μm滤膜，待分析；

4. 检测

色谱条件：
色谱柱： Ultimate^® XB-C18 液相色谱柱（4.6 mm x 150 mm, 3 μm）

时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 92 8 1 92 8 4 80 20 9 10 90 11 10 90 11.1 92 8 17 92 8

流动相：
A: 0.02mol/L乙酸铵水溶液（乙酸调节pH=4）
B: 甲醇
梯度洗脱程序见右图
流速：0.7 mL/min
进样量： 20 μL
柱温： 40°C
检测波长： 254 nm
运行时间：17 min

5. 附图

1. 柠檬黄； 2.苋菜红； 3.胭脂红；4. 日落黄 ；5.亮蓝
方法中使用到的耗材
1、 柠檬黄标准品：WEL-S-0001
苋菜红标准品：WEL-S-0002
胭脂红标准品：WEL-S-0003
日落黄标准品 ：WEL-S-0004
亮蓝标准品：WEL-S-0005
2、 固相萃取小柱：Welchrom^® P-WAX（60mg/3mL，P/N：WSP050306）
3、 液相色谱柱：Ultimate® XB-C18,4.6 mm x 150 mm, 3 μm（Ult3B18415）
4、 13mm，孔径0.22μm尼龙针孔滤膜（P/N: WEL-SFNY213022）
5、 12孔固相萃取装置（WEL-Vac-12）

来源：实验与分析