VE中苯并芘的HPLC检测

实验部分

仪器与试剂

岛津液相色谱仪（配荧光检测器），超声波清洗器，氮吹仪，Cleanert Bap-3固相萃取柱，Cleanert Silica固相萃取柱（天津博纳艾杰尔科技），Venusil ASB C18液相色谱柱（天津博纳艾杰尔科技），0.45μm PTFE针式过滤器（天津博纳艾杰尔科技）。

苯并芘标准品，正己烷（色谱纯），二氯甲烷（色谱纯），乙腈（色谱纯）。

样品制备

称取天然维生素E成品（或原料）0.5g于12ml样品瓶中，加入3ml正己烷涡旋震荡溶解，作为待净化液。

净化处理

在Cleanert Bap-3（500mg/6ml）小柱上面串联Cleanert Silica（500mg/6ml）小柱，先用5ml二氯甲烷活化串联好的小柱，再用5ml正己烷活化；将待净化液全部上样到小柱，再用2ml正己烷润洗样品瓶，然后上样到小柱；用10ml正己烷淋洗小柱后卸下Cleanert Silica小柱，再用5ml正己烷淋洗Cleanert Bap-3小柱一次，弃去全部流出液，最后用6ml二氯甲烷洗脱小柱并将流出液收集至12m样品瓶中，在40℃的条件下氮气吹干，用乙腈溶解定容至1ml，过滤待测。

液相条件

色谱柱：Venusil ASB C18；5μm，150Å；4.6×250mm；流动相，乙腈:水=80:20；流速，1.0ml/min；进样量，20μl；荧光检测器：发射波长406，激发波长384。

结果与讨论

固相萃取柱的选择

Cleanert Bap-3为聚苯乙烯二乙烯苯高聚物材料，利用高聚物苯环和苯并芘的π-π作用，其可以对苯并芘有很好的吸附保留。在植物油中苯并芘的检测应用中，用Cleanert Bap-3做小柱填充物可替代中性氧化铝做小柱填充物的方法。在Cleanert Bap-3（500mg/6ml）小柱上面串联Cleanert Silica小柱，可去除样品中维生素E等成份，而且不影响苯并芘的回收率。

线性关系和定量限

称取苯并芘标准品适量，用正己烷配制成浓度为100μg/ml的标准溶液。将标准溶液用乙腈稀释到浓度分别为：0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 ng/ml，按照上述条件分别注入液相色谱仪检测，以苯并芘的峰面积对其浓度作标准曲线，线性方程为y=37658x-47093，相关系数r=0.9996。10倍信噪比计算其最低定量浓度为0.5μg/g。

准确度与精密度

在天然维生素E样品中添加一定量的苯并芘标准溶液，所得回收率数据详见表1。

实际样品的检测

采用上述检测方法，对天然维生素E原料进行检测，并将检测结果与气质检测结果对比，两种方法的检测结果一致。

小结

Cleanert BAP-3 和Cleanert Silica固相萃取小柱，应用于天然维生素E及其生产原料的苯并芘检测，去除杂质的效果良好，前处理的操作过程简单、快速、准确。