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优化蛋白质组学中膜蛋白的溶解性

2018-05-31 12:16:34
据来自最近的研究,“在疾病的分子标志物和药物开发中,的组是至关重要的。然而,在这一领域的进展缓慢,主要来源于用分析膜蛋白非常困难。”

他说:“这项调查的目的是探讨和优化溶解膜蛋白的方法,用于CD14人单核的鸟枪法膜蛋白质组的研究。研究比较了几种体系:

i)纯有机相(甲醇)

ii)酸敏性洗涤剂3-[3-(1,1-bisalkyloxyethyl)pyridin-1-yl) propane-1-sulfonate (PPS);

iii)两种溶剂的混合(甲醇+PPS)。

首先比较了不同缓冲液的增溶效率,使用噬菌调理素bacteriorhodopsin作为膜蛋白的模型,在与FACS分析的CD14表达有98%正相似的、高度富集的人单核细胞群系中的膜蛋白亚蛋白质组(subproteome)上,应用比较了这些方法。结果表明,基于甲醇的缓冲体系溶解后,可测定194个蛋白,其中的93个(48%)是膜本体蛋白质(integral membrane proteins);使用甲醇和酸裂解剂的混合溶液给出相似的结果,测定了203个蛋白,其中的93个(46%)是膜本体蛋白质;而单独使用PPS,测定了216个蛋白,其中的75个(35%)是膜本体蛋白质。” SAIC-Frederick公司的X.Y. Ye 和其同事在文章中写到。

研究者们总结道:“这些结果表明,使用甲醇或甲醇+PPS的缓冲体系,比PPS溶解,可显著获得更多的膜蛋白用于鉴定/富集。”

Ye和同事们发表了他们的结果在:Optimization of protein solubilization for the analysis of the CD14 human monocyte membrane proteome using LC-MS/MS. Journal of Proteomics, 2009;73(1):112-122

来源:实验与分析

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