HPLC三重四极杆质谱联用检测猪肉中大环内酯类抗生素

摘 要：本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用快速测定猪肉中大环内酯类抗生素的方法。猪肉样品经处理后，用超高效液相色谱LC-30A分离，三重四极杆质谱仪LCMS-8040进行分析。8种大环内酯类抗生素在4分钟内得到快速分离和检测。螺旋霉素、替米考星在5- 200 μg/L；竹桃霉素、秦乐菌素、北里霉素、红霉素、交沙霉素、罗红霉素在1-500 μg/L浓度范围内线性良好，标准曲线的相关系数均在0.9996以上；对5 μg/L、20 μg/L和200 μg/L混合标准溶液进行精密度实验，连续6次进样保留时间和峰面积相对标准偏差分别在1.87%和5.04%以下，系统精密度良好。

关键词：大环内酯类抗生素 超高效液相色谱仪 三重四极杆质谱

大环内酯类抗生素(Macrolide antibiotics, MALs)是由放线杆菌或小单孢菌产生的一类抗生素。MALs已经成为全世界需求量和销售速度增长最快的抗生素之一。由于MALs具有广谱抗菌作用，可抵抗革兰氏阳性菌、支原体和部分革兰氏阴性菌，因此被广泛应用于治疗猪、牛、羊、虾及家禽的呼吸性和倡导传染性疾病，或在低剂量下作为饲料添加剂促进动物生长发育。食品中的大环内酯类抗生素残留易引起过敏河携带耐药因子菌株的扩散。和其他兽药一样，大环内酯类药物在动物源性食品中的残留监测与控制已经受到许多国家包括我国政府的高度重视。农业部公告第235号规定，红霉素在动物组织、奶和蛋中的最大残留限量(MRL)为40-200 μg/kg；替米考星在动物组织和奶中的MRL为50-l500 μg/kg；

秦乐菌素在动物组织、奶和蛋中的MRL为50-200 μg/kg。 本文使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用，建立了一种快速测定猪肉中8种大环内酯类抗生素（螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、秦乐菌素、北里霉素、红霉素、交沙霉素、罗红霉素）的方法，该方法分析速度快、重复性好、灵敏度高，供相关检测人员参考。

1． 实验部分

1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A与三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用系统。 具体配置为LC-30AD×2（输液泵），DGU-20A5（在线脱气机），SIL-30AC（自动进样器），CTO-30AC（柱温箱），CBM-20A（系统控制器），LCMS-8040（三重四极杆质谱仪）和LabSolutions Ver. 5.41（色谱工作站）。

1.2分析条件

液相色谱条件

分析仪器：LC-30A系统

色 谱 柱：Shimadzu Shim-pack XR-ODS III （2.0 mm I.D.×50 mm L., 1.6 μm）

流 动 相：A－0.1 %甲酸水溶液；B－乙腈

流 速：0.4 mL/min

进样体积：20 μL

柱 温：40℃

洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为15%。

质谱条件 离子源： ESI，正离子扫描

离子源接口电压： ESI(+)，4.5kV

雾化气： 氮气 3.0 L/min

干燥气： 氮气 15 L/min

碰撞气： 氩气

脱溶剂管温度： 250℃

加热模块温度： 400℃

扫描模式： 多反应监测(MRM)

驻留时间： 20 ms 延迟时间： 2 ms

MRM参数： 见表2

1.3

样品制备 标准溶液配制： 准确称取适量螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、秦乐菌素、北里霉素、红霉素、交沙霉素、罗红霉素8 种标准物质，用甲醇配制1000 mg/L 的混合标准储备溶液溶液，用流动相稀释成浓度为1、2、5、10、20、50、100、200、500 μg/L 的标准工作液。

样品前处理方法： 猪肉样品的制备、净化、提取参照《SN/T 1777.2-2007 动物源性食品中大环内酯类抗生素残留测定方法—第2 部分：高效液相色谱串联质谱法》。

2. 结果讨论

2.1 标准样品的产物离子扫描

2.2 标准样品的MRM 色谱图

图2 为500 μg/L 标准样品的MRM 色谱，8 种大环内酯类抗生素在4 分钟内得到了快速检测。

2.3 线性关系

将浓度为1、2、5、10、20、50、100、200、500 μg/L 的混合标准工作液按1.2 中的分析条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线如图3 所示。螺旋霉素、替米考星在5 ~ 200 μg/L；竹桃霉素、秦乐菌素、北里霉素、红霉素、交沙霉素、罗红霉素在1-500 μg/L 浓度范围内线性良好。线性方程、相关系数及由软件计算得检出限和定量限见表3。

2.4 精密度实验

对5 μg/L、20 μg/L 和200 μg/L 混合标准溶液连续6 次进样，考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表4 所示。3 个浓度标准品的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.02% ~1.87%和0.97% ~5.04 %之间，仪器精密度良好。

2.5基质加标实验

为了考察方法的灵敏度，在按照1.3中样品制备方法提取净化的空白猪肉基质样品中添加1 μg/L混合标样，猪肉基质空白色谱图如图4所示，猪肉基质加标样品色谱图如图5所示。从图中可以看到，基质加标样品在定量限上均有很好的响应。

3．结论

建立了使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用测定猪肉中8种大环内酯类抗生素的方法。该方法分析速度快，灵敏度高，精密度良好；螺旋霉素、替米考星在5 ~ 200 μg/L；竹桃霉素、秦乐菌素、北里霉素、红霉素、交沙霉素、罗红霉素在1-500 μg/L浓度范围内线性良好，所有样品的标准曲线的相关系数均在0.9996以上。在经样品前处理后的空白猪肉基质中添加混合标样，基质加标样品在定量限上均有很好的响应。

来源：实验与分析