ZIC®-HILIC 色谱柱检测奶粉中双氰胺

2018-05-31 11:51:33

1 前言

2013 年1 月，新西兰牛奶及奶制品被检测出含有低含量的有毒物质双氰胺(二氰二氨Dicyanodiamide，DCD)，已经下令禁售含有DCD的奶制品。中国的进口奶粉八成来自新西兰，全球60%以上的奶源产自新西兰。新西兰奶农通常会在牧草上喷洒双氰胺，防止肥料中的副产品硝酸盐流入河流和湖泊。

目前，还没有相应的食品含量标准和检测标准。默克密理博致力于分析方法的开发，为客户提供简便、快速的解决方案。双氰胺极性较强，易溶于水，中性及酸性条件下易电离，适合使用默克密理博的两性离子型亲水作用(ZIC®-HILIC)色谱柱分离。同时，双氰胺在218nm下有强紫外吸收，可以采用ZIC®-HILIC 色谱柱在HPLC-UV条件进行快速分析，亦可在LC-MS/MS进行痕量检测。

2 仪器及试剂

2.1 仪器设备

2.1.1 色谱柱：ZIC®-HILIC, PEEK HPLC Column 250 x 4.6 mm, 5 μm, 200 Å(货号:1.50458.0001)

2.1.2 HPLC：Agilent 1260HPLC(DAD检测器)

2.1.3 单道移液器Transferpette®S，Digital adjustable 500-5000ul(货号：704782 BR)

2.1.4微孔滤膜:0.45um,PTFE(货号：SLFHX13NL)

2.1.5纯水系统:Milli-Q3(Millipore)

2.1.6 PP离心管：50mL,带盖，含底座(货号:114822BR)

2.2 试剂

2.2.1色谱乙腈:LichroSolv®Acetonitrile Gradient Grade(货号:1.00030.4008)

2.2.2乙酸铵：Ammonium acetate for analysis EMSURE® ACS,Reag. Ph Eur(货号:1.01116.1000)

2.2.3甲酸：Formic acid 98-100% for analysis EMSURE® ACS,Reag. Ph Eur(货号:1.00264.1000)

2.2.4 2%甲酸溶液：取20ml甲酸，加入1000ml超纯水中

2.2.5乙腈-甲酸溶液：取700ml乙腈(2.2.1),与300ml 甲酸溶液(2.2.4)混合

3 实验方法

3.1 样品处理

方法1:

取婴幼儿配方奶粉2g于50mL PP管(2.1.6)中，加18mL 2%的甲酸水溶液(2.2.4)，加盖密闭。摇振60秒，再超声30分钟，取出，再摇振60秒，放入离心机中离心(4000转)，20分钟。取出，吸取上清液50ul，于10ml PP管中，加入950ul乙腈，加盖密闭，振摇60秒，吸取溶液，过滤，即得供试液。

方法2：

取婴幼儿配方奶粉2g于50mL PP管中，加20mL 乙腈-甲酸水溶液(2.2.4)，加盖密闭。摇振60秒，再超声30分钟，取出，再摇振60秒，静置，吸取上层溶液，过滤，即得供试液。

加标样品同法配制。

3.2 测试条件

3.2.1 色谱条件

流动相 (v/v): A-醋酸铵溶液(10 mM),B-乙腈

比例*：A:B=12：88

流速:1 mL/min

进样量：20ul

*必要时设置如下方法对色谱柱进行再生和平衡：

3.3 测试结果

按照方法1处理，结果如下：

3.3.1 对照品测试结果

图1 对照品图谱(DCD浓度1.25ug/ml)

双氰胺保留时间4.98min,理论塔板数13086,拖尾因子1.1.

3.3.2 无检出的奶粉空白

图3 配方奶粉空白

3.3.3 奶粉加标

图4 奶粉加标（测试液中加入的标样浓度:5ug/ml）

图5 奶粉加标（测试液中加入的标样浓度：0.05ug/ml）

3.3.3 某知名品牌奶粉

图6 某进口奶源的知名品牌奶粉图谱

该品牌奶粉中未检出双氰胺

4 结论

采用ZIC®-HILIC色谱柱，可用于双氰胺的快速检测。处理方法简单，色谱峰型良好，方法重现性良好(RSD<2%),检测浓度在0.5-10ug/ml之间现行关系良好(R=0.999),加样回收率在95.6-101.5%之间。按照方法1的处理，LOD为1.3ug/g奶粉，按照方法二处理,LOD可达0.07ug/g。

该色谱柱还能用于三聚氰胺、双氰胺、三聚氰酸、二甲双胍、尿素等的同时检测，如：