乳品中黄曲霉毒素检测

核心提示：国家质检总局24日公布了近期对200种液体乳产品质量的抽查结果。抽查发现蒙牛、长富纯牛奶两种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定。其中，蒙牛乳业(眉山)有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。对此，蒙牛在其官网承认这一检测结果并解释造成产品不合格的原因，是当地奶牛饲料因天气潮湿发生霉变，奶牛在食用这些饲料后，原奶中的黄曲霉毒素超标。

百科：黄曲霉毒素概念

黄曲霉毒素：

黄曲霉毒素(Aflatoxins)是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物，特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少，目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)，前者为基本毒性结构，后者与致癌性有关。B1的毒性(其毒性比氰化钾毒性高)及致癌性极强且耐热(B1的分解温度为268℃左右，一般烹调加工破坏很少)，在天然污染的食品中以B1最为多见。

检测方法：

测定乳品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、免疫层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。

新闻：蒙牛被检出黄曲霉毒素M1超标

国家质检总局24日公布了近期对200种液体乳产品质量的抽查结果。抽查发现蒙牛、长富纯牛奶两种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定。据称，牛奶中含有黄曲霉毒素，主要是因为奶牛食用了含有黄曲霉毒素的饲料所致。什么是黄曲霉毒素?黄曲霉毒素有何危害?该如何科学防霉?

———— 真 相 ————

黄曲霉毒素是目前世界上最知名和最被深入研究的霉菌毒素之一

黄曲霉毒素(Aflatoxin)是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的一种代谢产物，普遍存在于自然界中。黄曲霉毒素应该是目前世界上最知名和最被深入研究的霉菌毒素之一。是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物，特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少，目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)，前者为基本毒性结构，后者与致癌性有关。B1的毒性(其毒性比氰化钾毒性高)及致癌性极强且耐热(B1的分解温度为268℃左右，一般烹调加工破坏很少)，在天然污染的食品中以B1最为多见。

———— 污 染 ————

牛奶中只要含有黄曲霉毒素就不会被去除

中国农业大学食品学院营养与食品安全系主任，副教授何计国介绍，此次牛奶中检出的是黄曲霉毒素M，具有很强的毒性和致癌性。据了解，应是饲料受到了污染造成的。但是如果饲料的原料(粮食)保存好的话，污染黄曲霉毒素的概率不会很高。此次事件中的黄曲霉毒素来源于饲料，经过代谢形成。黄曲霉毒素是微生物产生的，不像三聚氰胺属于恶意添加。黄曲霉毒素是脂溶性的，如果牛饲料中存在黄曲霉毒素，牛肉中含量不会很高。但内脏特别是肝脏中含量会高。黄曲霉毒素非常耐热，加热到280℃都不会被破坏，所以牛奶中只要含有，就不会被去除。紫外线只能少量破坏。

黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中;在水中的溶解范围为10毫克/升— 20毫克/升，可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中，不溶于乙烷、石油醚和乙醚;易被碱或强氧化剂破坏;进入人体后主要经消化道吸收，大部分分布在肝脏、肾脏，少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中，其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。

人类接触黄曲霉毒素的主要来源是污染的食物，有两种通过膳食可以摄入：途径一是由受黄曲霉毒素(主要为B1)污染的植物性食物摄入，途径二是经饲料而进入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黄曲霉毒素(主要为M1)。

———— 毒 性 ————

黄曲霉毒素的毒性和致癌性最强

黄曲霉毒素是一种毒性极强的物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中，以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。生产企业如果使用劣质的原料，如发霉的花生、菜籽、玉米等生产食用油，则有可能造成黄曲霉素超标，对消费者的身体健康造成威胁。

食用受黄曲霉毒素污染的食品，会出现急性中毒。临床表现以黄疸为主，并有呕吐、厌食和发烧等症状。重症者在2—3周后出现腹水、下肢水肿，甚至死亡，死亡前出现胃肠道出血。黄曲霉毒素危害性大，存在范围广，为了预防黄曲霉毒素中毒事件的发生，维护人类健康，世界上已有70多个国家和地区对食品中黄曲霉毒素的含量作了限量要求。

———— 标 准 ————

牛乳及其制品中黄曲霉毒素M1不得超过0.5微克/公斤

由于黄曲霉毒素存在一定的不可控性，关于黄曲霉毒素超标的食品安全健康事件在各个国家都时有发生，对于黄曲霉毒素的完全隔绝是不太可能的，只能通过标准量的控制去进行管控。比如美国几乎所有的花生酱里都含有黄曲霉毒素，但是只要控制在标准范围以内，对人体还是无害的。世界范围内关于黄曲霉毒素的食品安全事件屡有发生，主要发生在东南亚，如泰国和菲律宾等国家，尤其是菲律宾，其谷物制品和花生酱等黄曲霉毒素的污染很严重，之前就发生过外国游客在菲律宾消费本地食品出现黄曲霉毒素急性中毒事件。

目前，测定食品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、免疫层析法、微柱筛选法、金标试纸法等我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准(GB2761-81)规定：玉米、花生仁、花生油中不得超过20微克/公斤;玉米及花生仁制品(按原料折算)中不得超过20微克/公斤;大米、其他食用油中不得超过10微克/公斤;其他粮食、豆类、发酵食品中不得超过5微克/公斤，婴儿代乳食品中不得检出，其他食品可参照以上标准执行;牛乳及其制品中黄曲霉毒素M1限量卫生标准(GB9676-88)规定，不得超过0.5微克/公斤。

———— 专家支招 ————

目前一般还是采取销毁食物的方式去控制黄曲霉毒素

黄曲霉毒素对于人类而言，其实是无法完全规避的，因为谷物等作物的霉变人类目前无法彻底控制，只能够通过一些手段去控制霉变量以及剔除食品中霉变的成分。其实控制的方式都是大家所熟知的，如保持谷物的干燥，保持储藏地点的空气清洁，低温储藏，适量地使用防霉剂进行处理等，另外可以在储藏的密闭容器内充入大量的二氧化碳以抑制霉菌的生成(大部分霉菌的繁殖需要氧气)。颗粒状的被污染粮食可通过晾晒、清洗消除部分黄曲霉，但如果是粉末状的食物或饲料，则很难通过以上方法清除。

防霉：控制粮食含水量在12%—13%以下即可防霉。保持米粒及花生外壳的完整，使用化学熏蒸剂，对防止霉菌侵染也有一定作用。

挑除霉粒：适用花生。因黄曲霉毒素主要存在于发霉、变色、破损及皱缩的花生中，挑除后，可使黄曲霉毒素含量显著降低。

碾轧加工及加水搓洗：适应于大米，因毒素主要存在于米糠及大米表层。脱胚去毒：适用于玉米。

脱胚法有两种：一是浮选，将玉米碾3mm左右的碎粒。加入清水，搅拌、轻搓，胚部碎片轻而上浮，捞出浮层;二是碾轧法，将玉米碾轧，去掉外皮及胚部。

加碱破坏毒素：适用于食用油。

其他：如紫外线照射，盐炒法等有一定去毒效果。

此外，还要加强食品卫生监测。但是有效控制的方式方法仅限于预防原料的污染，而对于已有食品中的黄曲霉毒素目前还没有行之有效的解决办法，各个国家目前一般还是采取销毁食物的方式去进行控制。

黄曲霉素厂商解决方案

华夏科创推出“检测黄曲霉毒素”两种不同解决方案

年关将至，又是一起起的食品安全事件，让国人惊魂未定的神经再次紧张了起来，某乳品公司生产的纯牛奶产品再次被国家质检部门查出黄曲霉毒素M1严重超标;某植物油产品，部分批次抽检不合格，同样是黄曲霉毒素B1指标不合格。北京华夏科创作为专业生产食品安全检测仪器的供应商，一直致力于为食品生产、加工企业，质检、食药、疾控等政府监管机构提供专业的仪器和完整的解决方案。

由华夏科创自主研发的NYART-1型黄曲霉毒素检测仪和DT211型真菌毒素、抗生素和兽药残留速测仪，分别采用两种不同的方法检测黄曲霉毒素，能够满足不同客户的需求。

NYART-1 型黄曲霉毒素检测仪，符合中华人民共和国国家标准 GB/T 18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》。此项技术是国家重大科技攻关成果，已于2005年通过科技部验收。这种新型技术及检测仪具有检测速度快、准确度高的优点，填补了国内空白，并达到国际先进水平。其检测基本原理是：将黄曲霉毒素样品混合组份通过固定相时，与抗体分子有特异免疫亲和力的黄曲霉毒素即被固定相上抗体结合，杂质随洗涤液流出微柱，再用甲醇将黄曲霉毒素洗脱，根据黄曲霉毒素分子荧光特性，用黄曲霉毒素专用定量荧光检测仪进行定量检测。

NYART-1 型黄曲霉毒素检测仪应用范围也较为广泛：如农产品市场安全监督监测中粮油产品及食品中大米、花生、大豆、食用植物油、玉米、稻谷、饼粕及饲料和酱油等产品中黄曲霉毒素含量测定;农产品及食品加工、储藏、育种、海关出入境、畜牧、流通等领域，或超市、商场食品的质量控制等，是实验室检测的良师益友。

DT211型真菌毒素、抗生素和兽药残留速测仪，是较为理想的快检仪器，体积小巧，操作简单，采用微型光谱成像技术和快速图像颜色分析技术，对胶体金试剂条和双流向酶联免疫试剂条的反应结果进行定性和定量检测，能够满足现场、应急、突发事件和车载等检测需要。该仪器可用于所有厂家生产的胶体金试剂条检测和双流向酶联免疫试剂条的检测，不受任何来源限制，能同时检测多个样品，并可升级扩充新的检测项目和范围。

针对乳品企业黄曲霉毒素超标，分析原因是由于奶牛食用了霉变饲料，导致乳汁中黄曲霉毒素M1超标。因此乳品的黄曲霉毒素污染主要来源是饲料，像玉米、稻谷、豆粕等，放久得饲料就可能发霉产生这种毒素。然而即使是牛奶加工中用高温的巴氏杀菌法也无法清除黄曲霉毒素，因此从源头严格监控和检测，是避免此类事件发生的有效办法。

以上两款仪器作为华夏科创的明星产品已在全国市场广泛推广，我们仍在持续努力的为客户开发出更好的产品，提供更完善的解决方案，为老百姓的饮食安全健康建起一道屏障。

月旭公司推出乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方案

近日，蒙牛纯牛奶被检测出强致癌物——黄曲霉毒素M1，消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测?月旭公司技术部迅速组织相关技术人员讨论和开发应用解决方案，现已整理出全套的专业检测方案，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。

1. 试用范围

牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品

2. 方法原理

黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。

3. 所需设备和耗材

黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom? IAC (1ml，25支/盒;3ml，15支/盒)(上海月旭提供);

高效液相装置带荧光检测器;

均质机;

水平振荡器;

SPE转接头及50ml大容量上样器：Welchrom? SPE Adapter(上海月旭提供);

分析天平(精度0.02 g);

SPE装置带抽真空系统：Welchrom? SPE Device(上海月旭提供);

黄曲霉毒素M1标准品;

PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH2PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml;

甲醇(色谱纯);

乙腈(色谱纯);

正己烷(分析纯)。

4. 样品前处理

牛奶样品

称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化;

发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)

称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化。

乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品

称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。

干酪

切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下匀浆5 min，超声提取30 min，6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中，同时加入30 mL正己烷，振摇2 min，分层后，弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL，转移浓缩液至离心管，烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中，加PBS溶液稀释至50 mL，6000r/min下离心5 min，上清液待净化。

奶油

称取5g(精确至0.01 g)试样，置于50 mL烧杯中，用20 mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪减压浓缩至约5 mL，加PBS稀释至约50mL，待净化。

5. 免疫亲和柱净化(3cc)

将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液，活化液不收集;

将待净化液加入免疫亲和柱，流速不超过5 mL/min，不收集流出液;

用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5 mL/min，抽真空1分钟，不收集流出液;

用1.5ml甲醇洗脱，流速控制在1d/s，收集洗脱液过膜后上机测试。

注：免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用

6. 色谱条件：

色谱柱： Ultimate? XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5μm(上海月旭提供)

预柱： Ultimate? C18，5μm，ULT5BG18(上海月旭提供)

流动相： 水:甲醇:乙腈=11:4:5

柱温： 35℃

检测波长： 发射波长：365nm，激发波长：450nm

进样量： 100μL

博纳艾杰尔黄曲霉毒素M1&B1检测方案

天津博纳艾杰尔科技有限公司，基于自身技术优势，及对乳品、饲料行业检测多年来的认知，整合出一套黄曲霉毒素检测的综合解决方案，可以提供黄曲霉检测几乎全部所需关键产品。

目前，关于乳品中黄曲霉毒素、食品中黄曲霉毒素的检测，有很多标准，GB、SN,归纳起来，多数采用免疫亲和柱净化-HPLC法检测，以及酶联免疫吸附法(ELISA试剂盒法)。

博纳艾杰尔可以提供整体检测所需关键产品：

类别作用名称规格

关键耗材净化黄曲霉毒素总量免疫亲和柱25支/盒,1mL

关键耗材净化黄曲霉毒素B1免疫亲和柱25支/盒,1mL

关键耗材净化黄曲霉毒素M1免疫亲和柱25支/盒，1mL&3mL

关键耗材净化Cleanert PEP 固相萃取柱60mg/3mL

关键耗材测定Venusil MP C18 液相色谱柱4.6*250mm,5um

关键耗材测定黄曲霉毒素ElISA 试剂盒96孔/48孔

关键耗材测定黄曲霉毒素总量胶体金快速检测卡50条/盒

关键耗材测定黄曲霉毒素总量胶体金快速检测卡50条/盒

关键耗材测定Venusil MP C18 液相色谱柱4.6*250mm,5um

试剂标品测定黄曲霉毒素混标液体(B1、B2、G1、G2)B1 1ug/ml;B2 3ug/ml;

G1 1ug/ml; G2 3ug/ml

试剂标品测定黄曲霉毒素B1标准品1mg

试剂标品测定乙腈，HPLC级溶剂瓶/4L

特殊器材测定黄曲霉素光化学柱后衍生反应池台

仪器测定岛津10AVP PIUS HPLC 单泵、单检测器、工作站带荧光检测器

仪器测定微孔板酶标仪450nm/630nm

仪器测定柱温箱台

咨询电话：400-606-8099

邮箱：service@agela.com.cn

常用检测方法对比：

1 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法

黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高，是一种准确定性定量的首选方法。

分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中,对黄曲霉毒素 B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围 0-300ug/kg.

参考案例：中草药酸枣仁中黄曲霉毒素的检测

2 酶联免疫吸附法(ELISA法)

原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.

ELISA方法通常用于大规模的筛选，由于其高同量的特点，是一种性价比很高的测试方法。

3一步式黄曲霉毒素检测胶体金试纸法

一步式黄曲霉毒素检测胶体金试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.

来源：实验与分析