AlphaLISA在生物检测中的应用

AlphaLISA检测生物分子原理。

AlphaLISA方法检测Amyloid β1-40结果。

AlphaLISA技术是基于增强的化学发光的一种均相免疫检测，跟传统的需要洗涤的ELISA检测相比具有很大的优势。

ELISA技术灵敏、特异，应用多样，因此被广泛采用。但其通常包含多次洗涤步骤，操作复杂，动态范围较窄，而且对抗体亲和力要求较高，这些缺点都限制了ELISA的应用，尤其是在进行生物标志物检测和药物筛选时。AlphaLISA利用作为供体和受体的微珠来进行生物分子的检测。如果样品中存在检测目标，供体微珠和受体微珠会由于抗体的特异性识别而相互接近，从而激发受体微珠上级联放大的化学发光反应，最后将信号传递到铕上，产生信号。具体来说，在680nm的激光照射下，供体微珠上的光敏剂将周围环境中的氧气转化为更为活跃的单体氧，该反应每秒钟可产生60 000个单体氧分子。单体氧在溶液中可扩散200nm，当它扩散到受体微珠时，与其上的化学发光剂发生化学反应，从而激发了一连串的化学发光反应，最后将能量传递到铕上，在615nm产生信号。

AlphaLISA 是均相技术，避免了繁琐的洗涤步骤，操作简单；其长波长激发，短波长发射，背景很低；作为能量传递中间体的单体氧，每秒钟可产生60 000个，信号强；微珠直径250nm，却可结合200~300个抗体，可进行低亲和力生物分子的检测；信号传递到铕，检测波长为615nm，抗干扰能力强。所以，用AlphaLISA进行免疫检测，灵敏度可达10 amol，线性范围为3~5个数量级，可进行生理状态下生物样品的检测，尤其是血液样品，并且可以采用低亲和力的抗体进行实验。到现在为止，很多跨国制药公司，如葛兰素史克、诺华、诺和诺德等都采用了AlphaLISA进行免疫检测和药物筛选。

采用AlphaLISA技术，整个实验过程只需要简单的三步：1. 加入样品；2. 加入与抗体偶联的受体微珠和生物素化的抗体，孵育；3. 加入与生物素偶联的供体微珠，孵育。随后就可以用仪器预设的程序进行检测了。以Amyloid β1-40检测为例，葛兰素史克公司将AlphaLISA技术与另一较灵敏的电化学技术进行了比较，发现AlphaLISA可进行冷冻样品的检测，在保证更好效果的前提下，时间减少了1/4，花费降低了80%，并且标准差由28.91降低为10.34，假阳性率也大大减少。该方法检测Amyloid β1-40（试剂盒），最低检测限为88pg/ml，线性范围为88 ~100 000 pg/ml。

PerkinElmer公司能够为AlphaLISA检测提供从样品/分析准备到检测、数据分析的全方位的产品和技术支持，包括：AlphaLISA检测试剂盒（包括VEGF、Amyloid β1-40、Amyloid β1-42、Insulin、Human IgG、 EPO、 HIV p24、 TNFα等等）、各种规格的OptiPlates/AlphaPlates检测板、带Alpha模块的Envision检测仪以及JANUS/FlexDrop AlphaLISA工作站等。更为重要的是，PerkinElmer公司多年来一直投入大量人力物力针对AlphaLISA技术进行产品研发和应用开发，并与各大跨国制药公司研发中心建立了稳固深入的合作交流联系。