合理选择HPLC稀释剂

应用高效液相色谱检测时，流动相的选择十分重要，因此稀释剂的选择就成为重中之重。根据高效液相色谱检测的不同要求，可以选择不同的类型的稀释剂。而选择时的LC-MS级这一指标到底是什么意思呢?

图1. 使用何种质量的稀释剂应由用户自己确定，选择合适的稀释剂可明显降低色谱分析的成本。

高效液相色谱检测中要使用高纯度稀释剂作为流动相，有不同纯度指标的稀释剂可供选用，例如HPLC级稀释剂、梯度级稀释剂以及LC-MS级稀释剂。在色谱分析中，应用不同稀释剂的质量和稀释剂的纯度之间有什么关系?稀释剂的质量为何要与检测任务保持匹配?

稀释剂的质量表示的是：它们是有同一种原料生产的，名义上只有很小的杂质(根据不同的产品：99.8%～99.9%)。但这微量的杂质可在色谱分析时因不同的探测方法由被测样本而带来变化：此时的纯稀释剂已经不是原来意义上的“纯稀释剂”了。下面，我们将举例说明稀释剂质量的三个等级，以及使用合适质量稀释剂的意义。

HPLC级纯度

HPLC纯度主要是从利用紫外线探测仪或者荧光探测仪进行等度分离这一方面来描绘的稀释剂的质量。这种纯度的稀释剂通过其很高的纯度和所有重要波长紫外线很高的穿透性、很低的自身荧光以及很低的挥发残留物和很低的酸性和碱性而著称。

这种稀释剂应能承受特殊的清洁过滤处理，以便尽可能的除去干扰物质。这样一来，由杂质引起的干扰和影响也都降低到了最低程度、也能够降低色谱分离的背景噪音。在完成过滤清洁之后，它们将按照紫外线探测和荧光探测的方法在高效液相光谱仪中进行测试。

经质量监控可以保证：用户可以得到始终如一的稀释剂质量;保证高效液相光谱分析有着很高的重复精度。

梯度级纯度

在高效液相色谱分离技术中，杂质的色谱法分离除等度方法之外还常常采用梯度清洗方法。在梯度清洗过程中液相的组成成分也在发生变化;例如在反相色谱中有机物含量增加。这对于不适合按照梯度分离法配制的稀释剂来讲会明显的提高紫外线探测时的基线、对检测方法的灵敏性带来严重的影响。为了能够最佳的利用Gradient纯度的稀释剂进行色谱分析，就必需对Gradient纯度的稀释剂进一步清洁。它除了有利用紫外线和荧光进行探测的性能之外，还要对它的梯度分离特性进行核查;从而保证Gradient纯度的稀释剂在一个批次的检验中有着稳定的质量。

LC-MS级纯度

随着实验室中引进了超高效液相色谱(U)HPLC质子分析(MS)技术之后，由于其很高的指示灵敏度和新的分析方法，也对稀释剂提出了一些新的要求。例如在对质子分析技术应用提出了很高的离子效率的同时也要求有着很低的离子背景。这样，稀释剂就要相应的净化处理。而最重要的净化就是清除微量元素、有机物质成分和(金属)离子。它们都能够带来很高的背景噪音，在内收过程中把被分析的物质也收进来;从而明显的降低检测的灵敏度。在质量监控时，要对利血平(m/z 609.49)进行测试，作为稀释剂质量监控的标准。

在测试过的质量范围内只有很小的背景噪音、没有因杂质带来的干扰信号。由于LC-MS纯度的稀释剂有着很高的纯净度因此也非常适合于在超高效液相色谱分析中使用。它保证了超高效液相分析柱有着很长的使用寿命。因此也常常对它在紫外线和荧光探测中的适应性进行核查。

小结

不同质量的稀释剂都有自己的生存权利。分析时使用质量合适的稀释剂是非常有意义的，也是值得推荐的。只有这样，与批次无关的色谱分析才能得到准确的、可重复再现的检测结果。

扩展阅读

高效液相色谱分析技术中的纯度

除了HPLC级、梯度级和LC-MS级纯度之外，有些生产厂家还使用了介于梯度级和LC-MS级之间的稀释剂纯度。使用低纯度稀释剂虽然可行但却容易带来一定的风险。由于从生产厂方没有指定高纯度质量监控的方法，色谱分析结果的正确性和重复精度都没法得到保障。每一新批次的色谱分析都会因很高的背景噪音或者干扰峰而得到令人吃惊的结果。

来源：实验与分析