紫外分光光度法测定新鲜蔬菜中VC含量

维生素C，简称VC，是一种水溶性的维生素，广泛存在于新鲜蔬菜中，具有防止衰老、润滑肌肤、增强免疫力等作用，是维持人体正常代谢的必需物质。人体缺乏维生素C 易得坏血症，所以又称抗坏血酸，它不能在体内合成产生，只能通过合理的膳食而得到。蔬菜中维生素C 的测定方法较多，目前主要有2 ，6 - 二氯靛酚滴定法、碘量法、2 ，4 - 二硝基苯肼法、萤光分光光度法和电化学法等。这些方法各有其特点，但也大都有一定的局限性: 如有些方法操作繁琐、费时、苛刻，有些方法则有所需仪器造价高的缺陷。本文在有关文献的基础上，基于维生素C 在紫外光谱246 nm波长处有一最大吸收峰，进而通过标准曲线法建立了一种蔬菜中维生素C 含量的测定方法，与其它方法相比，具有操作简便、准确、快速、检出限低的优点。

实验部分

仪器与试剂

752 型紫外-可见分光光度计;PHS -3 C 型酸度计;组织捣碎机; 高速离心机;100 mL 容量瓶;1000mL容量瓶;10 mL 吸量管;10 mL 移液管。维生素C 储备液( 1.0mg / mL ) : 秤取0.1g (准确至0.1mg ) 维生素C，用少量2% 偏磷酸溶解后转移至100mL 容量瓶中，用偏磷酸稀释至刻度，摇匀，即为贮备液，存放于冰箱中; 维生素C 标准溶液( 0.1mg / mL ) :将上述储备液稀释10 倍后即得0.1mg/mL的维生素C标准溶液;2% 偏磷酸溶液;所有试剂均为分析纯。

实验方法

标准曲线的绘制

用吸量管分别移取0.00、1.00、2.00、4 .00、6.00、8.00、10.00 mL 含维生素C 0.1mg / mL 的标准溶液于7 个洁净、干燥的100mL 容量瓶中，用2% 偏磷酸溶液稀释至标线，摇匀。以蒸馏水为参比，在λmax = 246 nm处，用1cm石英比色皿测其吸光度，并以吸光度A 为纵坐标，维生素C 浓度C 为横坐标绘制标准曲线。

试样的测定

取一定量的新鲜蔬菜，冲洗干净，加等量2% 偏磷酸溶液，用组织捣碎机捣碎成匀浆，取适量匀浆转至1000mL 的容量瓶中，加2% 偏磷酸稀释，摇匀。在1000 r / min 的高速离心机中离心10 min ，移取离心管上层清液10.00mL，用2% 偏磷酸溶液稀释定容100mL容量瓶。以蒸馏水为参比，在λmax = 246 nm 处，用1cm 石英比色皿测试样吸光度。

结果与讨论

最大吸收波长的确定

维生素C 是六碳的多羟基内酯，是含有烯二醇基的化合物，在紫外光区范围内有吸收。取一定浓度的维生素C 溶液至1 cm 的石英比色皿中，以蒸馏水为参比，在200~380 nm 波长范围内进行扫描，测定最大吸收波长为246 nm(λmax =246 nm) ，结果如图1 所示。

图1.维生素C 的紫外吸收光谱

溶剂的选择

维生素C 溶液在空气中尤其是碱性条件下容易被氧化而变得极其不稳定，为此，样品的前处理至关重要。因为偏磷酸、草酸能够较好地抑制维生素C 的氧化酶，防止维生素C 被氧化而起稳定作用，所以加入偏磷酸、草酸可以解决体系中维生素C 的稳定性问题。实验发现草酸在波长246 nm 处有较强的吸收峰，不适合处理维生素C 处理溶液，而偏磷酸在波长246 nm 处

无明显无吸收。因此，本实验选择偏磷酸作为紫外分光光度法的溶剂。

体系酸度对吸收的影响

保持其它条件不变的前提下，加入一定的盐酸或氢氧化钠溶液，改变体系酸度，考察其紫外光谱的影响，结果发现pH 小于5 时随pH 的减小吸光度逐渐减小，很有可能是由于维生素C 在强酸性条件下发生电离而造成的; pH>10 时，随pH 增大，吸光度值逐渐减小则是由于在碱性环境中容易被氧化，因而不稳定、分解造成的。而pH 值在5~10范围内时，在最大吸收波长246 nm 处的吸光度值较大且无明显变化，综合考虑，实验不加盐酸、氢氧化钠溶液时较好，此时体系pH 值处在5~6.5范围内。

工作曲线、回归方程及检出限

图2. 维生素C 的标准曲线

在最佳实验条件下，加入不同量的维生素C，测其吸光度，绘制工作曲线( 图2 所示) 。结果表明，维生素C在1.0~10.0μg/ml 范围内吸光度A 与浓度C 之间符合朗伯—比尔定律，呈良好线性关系。其回归方程为A=0.0551C-0.0063，r=0.9998，检出限为0.05μg/ml。

干扰实验

对常见的共存组分进行了干扰实验，结果表明8mg/100g的维生素C存在下，相对误差控制在±5%以内时，允许的共存物的量为: 果糖8mg、葡萄糖8mg、柠檬酸4mg 及Na2 CO3、KCl、Mg SO4、NaHCO3各3mg。因此，本法具有较好的选择性，一般蔬菜中存在的物质对实验测定结果无明显影响。

样品分析

根据实验测定方法，测定了新鲜蔬菜: 西红柿、青椒、黄瓜、胡萝卜、土豆中的维生素C 含量，同时进行加标回收实验，结果如表1 所示。

表1. 蔬菜中维生素C 含量的测定结果

结论

基于维生素C 在紫外光区有明显的吸收而建立的蔬菜中维生素C 含量的测定方法的线性范围为1.0~10.0ug/ml，回归方程A = 0.0551 C-0.0063，r = 0.9998，检出限为0.05μg / mL，回收率在99.9% ~101.2% 之间，相对标准偏差RSD<5% 。本实验方法具有结果准确、检出限低的特性，测定结果令人满意，易于推广。